Extracción de ADN de individuos de Radopholus similis

Abstract

El objetivo del trabajo fue desarrollar y/o validar una metodología para la extracción de ADN de R. similis aislados a partir de muestras de raíces de Musa AAA enfermas. La extracción de ADN se realizó en nemátodos individuales, los cuales se identificaron utilizando medidas morfométricas y clasificados por sexo, de los cuales unos fueron fijados en el alcohol al 95 por ciento y otros en formalina caliente al 4 por ciento los productos de la extracción se resolvieron en geles de agarosa-TBE al 1 por ciento y se visualizaron en un transiluminador ultravioleta. Para estimar el tamaño aproximado de los fragmentos analizados, se utilizó un marcador de masa molecular de 0,5 hasta 10 Kb. El protocolo utilizado permitió observar una cantidad importante de ADN no obstante, las variables concernientes a la concentración de agarosa, tiempo de exposición al amortiguador de extracción y período de electroforesis en gel influyeron directamente sobre la calidad de los resultados, dado que el material es muy susceptible a estos aspectos. No se presentaron diferencias en la cantidad de ADN desplegado, en relación con las sustancias utilizadas para la preservación de los nemádotos sin embargo los resultados demostraron que el almacenamiento prolongado de los especímenes en esas sustancias podrían afectar la calidad de ADN.