Desarrollo de un sistema de cultivo in vitro para los explantes nodales de caoba (Swietenia macrophylla, King)

Abstract

La investigación se realizó en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la Unidad de Biotecnología del CATIE, de mayo de 1996 a octubre de 1997. El objetivo general del trabajo fue establecer una metodología para el cultivo de microestacas de caoba (Swietenia macrophylla, King) in vitro, que sirva de base para el desarrollo de un sistema de micropropagación de genotipos seleccionados. Se utilizaron plántulas de caoba in vitro de dos semanas de edad. La mejor fuente de explantes primarios la constituye el nudo cotiledonar en comparación con el nudo de la escama foliar y el eofilar. El subcultivo por cuatro ciclos consecutivos del nudo cotiledonar mostró el gran potencial de esta fuente de explantes. Los cortes histológicos revelaron la presencia de al menos dos yemas supernumerarias ubicadas en dirección descendente en cada axila del nudo cotiledonar con diferentes etapas ontogénicas. La primera en madurar es la yema más alejada de la axila del eje embrionario. El mejor explante secundario lo constituye la yema de la escama foliar proveniente de los brotes cotiledonares, cultivados en posición horizontal sobre el medio de cultivo. La multiplicación de los brotes derivados del explante secundario en el medio MON suplementado con 6.5 ¿M de BAP y 2.2 ¿M de 2-ip fue superior en términos de calidad de brotes producidos con respecto a los otros medios evaluados. En este tratamiento, el número promedio de brotes por explante así como la altura promedio de los brotes fue superior. El 60 por ciento de este tipo de explante puede ser reciclado para maximizar la Producción de brotes. Explantes secundarios cultivados en el mismo medio pero en forma líquida en el sistema de inmersión temporal automatizado (RITA R) brotaron en un 100 por ciento. Frecuencias de inmersión de 3 minutos cada 3 ó 5 días permitieron el desarrollo de brotes de buena morfología y la reducción total de fenolización y vitrificación en el explante. Los brotes generados en la fase de multiplicación fueron subcultivados en un medio de desarrollo como paso intermedio de acondicionamiento para el enraizamiento. Este medio constituido por las sales minerales de WPM, carbón activado y sin reguladores de crecimiento permitió el alargamiento de los brotes y una mejor apariencia foliar. El uso de un sistema de enraizamiento secuencial caracterizado por tres fases (inducción, expresión y desarrollo de raíces), permitió obtener un 70 por ciento de enraizamiento in vitro, lo que favoreció la aclimatación de las vitroplantas en el invernadero. De un total de 48 vitroplantas en aclimatación, sobrevivió un 27 por ciento, estas plantas aumentaron un promedio de 3.5 cm de altura a los 60 días en el invernadero. La micropropagación de caoba a partir de plántulas provenientes de semilla significa una etapa de estudio importante para conocer el comportamiento de esta especie en cultivo in vitro. Estos primeros resultados constituyen una base de trabajo para la aplicación de esta metodología en la multiplicación de genotipos seleccionados en apoyo a los programas de mejoramiento genético y la conservación de los recursos forestales.