Liberación de protoplastos, reconstitución de la pared celular, proliferación del callo en tejidos de callo de Coffea arabica L.
Alternative title
Protoplast liberation, cell wall reconstitution, and callus proliferation in Coffea arabica L. callus tissues.
Abstract
Uma metodologia para liberação e cultura de protoplastos de tecidos de café foi definida a fin de permitir a possibilidade de manipulação genética dentro do genero Coffea. Uma combinação de 2,5% Pectinase, 3,5 por cento, Driselase, 0,51 molal manitol e 6 IM CaCl, em pH 5,5 foi considerada ótima para liberação de protoplastos de células de calos de café após 7 horas de incubação a 50 rpm. A preparação de protoplastos foi pirificada por filtração através duas peneiras de aço inoxidável de 150 e 38 um. O filtrato foi coletado em tubos de centrifuga, centrifugado a 100 g por 3 min, o supernadante foi removido e o pellet de protoplastos foi resuspenso em 3 ml de meio de reseneração de parede. Esta rotina foi repetida tres vez para diluir os enzimas e eliminar or debris celulares. Finalmente, o pellet foi resuspenso em 1 - 2,5 ml de meio de regeneração de parede para atiingir uma densidade de 10°5 protoplas 105/ml. Suspensões de protoplastos de 0,5 ml foram cultivadas em placas de cultura contendo multipas divisões em condicões de luz difusa e alta humidade. Após 5 dias, o meio de regeneração de parede foi diluido com o meio de crescinento e a regeneração de parede celular em protoplastos foi observada com 0 uso de Calcoflror 0,1 por cento sob microscópio fluorescente. A regeneração de parede celular e a proliferação de calos foram observados em cerca de 30 por cento das culturas.
Keywords
Delegation
Sede Central
Publisher
Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura (IICA)
Is part of
Turrialba; Vol. 30, no. 2
Status
openAccess
URI (Permanet link to cite or share this item)
https://repositorio.catie.ac.cr/handle/11554/12251Collections
- Turrialba [1345]