Establecimiento aséptico y propagación in vitro de Erythrina fusca y Erythrina poeppigiana por microestacas

Abstract

La investigación se realizó durante el período de enero a diciembre de 1989, en la Unidad de Biotecnología del CATIE (Laboratorio Cultivo de Tejidos). Los objetivos fueron: 1) determinar y contrarrestar los problemas que presenta el establecimiento del explante in vitro de Erytrhina procedente de material de campo, 2) establecer una metodología para el cultivo in vitro de estacas de dos especies de Erythrina, 3) estudiar la posiblidad de obtener la multiplicación masiva en ambas especies. Erythrina spp, es una leguminosa árborea conocida en nuestro medio como poró. Es ampliamente usada en Costa Rica para sombra en cafetales, cacaotales, así como para cercas vivas y como suplemento para la alimentación de vacunos y caprinos. Se propaga generalmente por estacas, ya que es un método rápido y exitoso, sin embargo no se pueden obtener gran cantidad de plantas a partir de un sólo árbol. El cultivo de tejidos se presenta como una alternativa, para facilitar la rápida multiplicación de genotipos seleccionados. Entre los métodos de micropropagación, está la multiplicación por meristemas laterales, la cual consiste en estimular el desarrollo de las yemas localizadas en las axilas de las hojas este método presenta la ventaja de que los individuos muestran gran estabilidad genética. Se trabajó con Erythrina fusca y Erythrina poeppigiana. El explante utilizado fueron estacas de 2 cm y 8 cm de longitud, con varios entrenudos, con presencia de yemas laterales lantentes. Se ensayaron varios procedimientos de desinfección superficial previo al cultivo in vitro. Se realizaron pruebas para determinar la acidez (pH) que mejor inhiba el desarrollo de bacterias así como concentraciones de antibióticos en el medio de cultivo. Uno de los problemas principales fue la contaminación por hongo por lo que se probó adicionar fungicidas al medio de cultivo. El medio usado fue el básico de Murashinge y Skoog (MON) más 10 g de Polivinyl Pyrrolidone (PVP-sigma Chemical 36OR), sacarosa al 1 por ciento, y agar 0.7 por ciento. En la etapa de inducción de yemas se trabajó con 0, 2, 4, 8 mg/l de benciladenina (BA) y 0, 0,1, 0,3, 0,5 mg/l de ácido indolbutírico -- (AIB). Los porcentajes de contaminación, sobrevivencia y explantes limpios variaron con la especie y tratamiento. Para Erythrina poeppigiana se alcanzó el menor porcentaje de contaminación fungica y bacterial de 30 y 12 porciento respectivamente y, para Erythrina fusca se encontró un 15 porciento para contaminación fúngica y un 10 porciento para bacteria. Se concluyó que el mejor valor de pH que ayudó a controlar el desarrollo de bacterias fue 4,6. El desarrollo de hongos se controló con 1 g/l de benlate adicionado al medio de cultivo. El uso de 100 a 300 mg/l de ampicilina y tetraciclina controlaron el desarrollo de bacterias dependiendo de la cantidad de inóculo que presentara el material. Los mejores tratamientos para el desarrollo de yemas fueron 2 ó 4 mg/l de BA para Erythrina poeppigiana y 8 mg/l de BA + 0.3 mg/l de AIB para Erythrina fusca siendo este un 76 y 92 porciento, respectivamente.