Germinación y reproducción in vitro de la bacteria Paenibacillus (= Bacillus) lentimorbus

Abstract

Con el objetivo de desarrollar una metodología de producción in vitro de la bacteria Paenibacillus (=Bacillus) lentimorbus, causante de la enfermedad lechosa en las larvas de los escarabajos, se analizó la ger-minación de las esporas en medios de cultivo artificiales. Suspensiones acuosas de esporas de P. lentimorbus fueron tratadas con cuatro, cinco y seis choques de 80 {eth}C por 20 minutos, y luego se cultivaron sobre tres medios de cultivo sólidos (J, MYPGP y un nuevo medio, Y) preparados a tres niveles de pH. Los choques de temperatura mostraron ser un factor importante para inducir la germinación de las esporas y eliminar los contaminantes de los medios de cultivo. La mayor germinación se observó en el medio MYPGP preparado a un pH de 8,0 e inoculado con esporas tratadas con seis choques de temperatura. Esta combinación de tratamientos mostró los más bajos niveles de contaminación. Se estudió además la reproducción de las células vegetativas de la bacteria usando los medios J, MYPGP y Y preparados en forma líquida y a tres niveles de pH. La máxima concentración de células vegetativas (2,6x10 exponente 8 vegetativos/mL) fue obtenida en el medio MYPGP a un pH de 8,0. Al realizar pruebas de patogenicidad con las células vegetativas germinadas sobre los medios sólidos y con las reproducidas en los medios líquidos, se observó una baja mortalidad de larvas de Phyllophaga elenans en un avanzado tercer estadio de desarrollo. Spore germination in artificial media was analyzed in order to develop an in vitro production methodology for Paenibacillus (=Bacillus) lentimorbus, a bacteria causing the milky disease on scarab larvae. Temperature shocks (up to six exposures of twenty minutes at 80 {eth}C) showed to be an important factor for inducing spore germination and eliminating contamination bacteria in artificial media. Samples of aqueous suspensions of P. lentimorbus were treated with four, five, and six temperature shocks of 80 {eth}C, of twenty minutes each, then cultured on three different solid media (J, MYPGP, and a new Y medium) prepared at three pH levels. The highest germination was observed with MYPGP prepared at pH 8.0 and cultivated with spores treated with six temperatures shocks. This treatment combination also showed the lowest contamination rate. The reproduction of vegetative cells was further studied using J, MYPGP, and Y prepared as liquid media at three pH levels. The maximum vegetative cell concentration (2.6x10 exponent 8 vegetative/mL media) was again obtained on MYPGP media prepared at pH 8.0. Pathogenicity tests with vegetative cells from spores germinated on solid artificial media and reproduced on liquid media produced a low mortality rate on late third instar larvae of Phyllophaga elenans.