Estudio morfogénico de cacao (Theobroma cacao L.) empleando embriones haploides

Abstract

El presente estudio se realizó en la Unidad de Biotecnología del Programa de Mejoramiento de Cultivos Tropicales del CATIE, Turrialba, Costa Rica con el fin de establecer la metodología necesaria para el rescate de embriones provenientes de semillas aplanadas de cacao, considerada una fuente de haploidía y su caracterización morfológica, además estudiar la aplicación del cultivo in vitro en la micropropagación de cacao utilizando cotiledones provenientes de éstas semillas a través del callo y suspensiones celulares. Para los efectos se estudió la respuesta morfogénica de ejes embrionales de los híbridos EET-95 X SCA-6 y POUND-7 X UF-613. Estas estructuras que se aproximan a los embriones provenientes de semillas aplanadas permitió determinar como medio apropiado las sales MON suplementado con (mg.1 exponente-1) tiamina-HCl 1, piridoxina-HCL 1, ácido nicotínico 1, glicina 4, inositol 200, glutamina 200, caseína hidrolizada 200, sacarosa 40000 y gel rite 1500. Los embriones fueron mantenidos en incubación a una temperatura 27 más menos 3 y un fotoperíodo de 16 horas. El porcentaje de plántulas desarrolladas fue muy variable y los valores fluctuaron de 16 a 87 por ciento. Los embriones y plántulas se caracterizaron como tipos morfológicamente que se correlacionaron con los tipos de haploides existentes en cacao, luego las plantas haploides se verificaron mediante el conteo de cromosomas en hojas jóvenes, obteniéndose un 1.7 por ciento de haploidía. En el medio en que se efectuó el rescate de embriones se presentaron diferentes respuestas morfogénicas observándose organogénesis y embriogénesis somática en los híbridos POUND-7 X UF-613, UF-613 X IMC-67 Y EET-62 X SCA-6. El medio MON suplementado con 2,4-D, enriquecido con caseína hidrolizada y agua de coco promovió un crecimiento rápido y sostenido de callo a partir de cotiledones de semillas aplanadas. La suplementación de éste medio con BA y ANA en una proporción 3:1 permitió la formación de embriones somáticos. El callo inducido en el medio MON suplementado con 2,4-D y desarrollado en el mismo medio basal enriquecido con caseína hidrolizada, al transferirse a un medio MON líquido suplementado con 2,4-D se obtuvo con éxito la suspensión celular con un incremento del peso fresco de 25 veces en 6 semanas con subcultivos realizados cada 14 días. La cinética de crecimiento del callo durante 7 semanas indica un mayor desarrollo del mismo después de dos semanas de inoculado el explante desde la quinta hasta la sétima semana al crecimiento fue menor y a partir de ésta semana no se obtuvo ningún incremento en el crecimiento