Suspensiones celulares y embriogénesis somática en Musa acuminata spp. malaccensis

Abstract

Se realizaron estudios en embriogénesis somática a partir de callos y suspensiones celulares utilizando embriones cigóticos inmaduros de Musa acuminata spp. malaccensis. Se hizo un estudio preliminar de la embriogénesis cigótica in vivo con el objeto de determinar histológicamente el estadío de desarrollo de los embriones utilizados en esta investigación, y además comparar los estadíos de desarrollo de la embriogénesis cigótica con la embriogénesis somática. Se produjo la formación de callos embriogénicos utilizando un medio semi-sólido con 2 mg.l-1 de picloram, tanto en condiciones de luz como en condiciones de completa oscuridad. La formación de embriones somáticos a partir de los callos se logró en un medio semisólido con la concentración de picloram reducida a 0,5 mg.l-1. Se probaron diferentes medios de cultivo para la germinación de los embriones somáticos. Los porcentajes de germinación estuvieron entre 20-36 por ciento. Se establecieron suspensiones celulares cultivando callos de diferentes edades en medio líquido. Se observó un mejor crecimiento celular y la formación de embriones somáticas en las suspensiones iniciadas con callos entre 7-15 semanas de edad. Preparaciones frescas al microscopio de las suspensiones mostraron la presencia de numerosas células embriogénicas en división. Los embriones somáticos producidos en las suspensiones celulares fueron separados por filtración e inoculados en un medio de germinación. Los porcentajes de regeneración de plantas a partir de estos embriones oscilaron entre 12.5-22.6 por ciento. Alícuotas de 0,5 ml de filtrado fueron utilizadas para hacer un plaqueo en un medio basal y en un medio de germinación. Después de 30 días se observó la formación de numerosos embriones somáticos, principalmente en el plaqueo realizado con las suspensiones iniciadas con callos entre 7-13 semanas de edad. El estudio histológico de los callos mostró que los callos muy jóvenes presentan una estructura muy compacta. Durante las siguientes semanas la estructura del callo se vuelve más friable, lo que explica la facilidad con la que estos callos formaron mejores suspensiones celulares. Los callos de más de 21 semanas se vuelven nuevamente muy compactos y diferenciados. Los cortes histológicos de los embriones somáticos maduros mostraron una estructura bipolar con la presencia de polos radiculares, gémula y bandas procambiales. Aunque los porcentajes de regeneración de plantas en esta investigación son bajos, resultan mayores que los obtenidos en otras investigaciones en Musa: 1.5-12 por ciento (Novak, et al., 1989) y 10-14 por ciento (Dhed'a et al., 1991). La utilización de reguladores químicos como ABA y hexositoles, o mecanismos de separación física como filtración, permitirían una mejor sincronización en el proceso de diferenciación de los embriones somáticos. Esto permitiría obtener mayores porcentajes de germinación. Por primera vez en esta especie, se logró la regeneración de plantas completas a partir de suspensiones celulares por la vía de embriogénesis somática. La simplicidad de esta técnica abre una nueva perspectiva para el mejoramiento genético de los diploides de Musa. Las suspensiones celulares son un material valioso para investigar sobre la obtención y fusión de protoplastos, selección in vitro de variantes y técnicas de ingeniería genética. Esto permite realizar estudios sobre transformación genética utilizando diferentes métodos de transformación directa e indirecta.